Pribolab - IAC-012-3-50PriboFast®黄曲霉素M族免疫亲和柱3ml-60947

一、产品用途：

本产品可选择性吸附样品提取液中的黄曲霉毒素 M1、M2，

从而实现对目标物的特异性纯化。过柱纯化后的样品液杂质显著减少 ，可用于不同分析方法的测定。

二、概述：

黄曲霉毒素是一类真菌(如黄曲霉和寄生曲霉)的有毒的代谢产物 ，是一种毒性极强的物质 ，具有很强的致癌性。黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时 ，可导致肝癌甚至死亡。黄曲霉毒素 M1 是黄曲霉毒素B1 的羟基化代谢产物，也是一种强致癌物质。牛乳及其制品是易受到黄曲霉毒素 M1 污染的食品之一。

三、反应原理：

本产品测定的基础是抗原抗体反应。黄曲霉毒素 M1/M2单克隆抗体固定于柱内凝胶上，样品中的黄曲霉毒素 M 族经过提取、过滤、稀释，然后缓慢通过黄曲霉毒素 M 族免疫亲和柱，在柱内黄曲霉毒素 M 族与抗体特异性结合，之后洗涤免疫亲和柱 ，除去未结合的其他物质。用甲醇洗脱黄曲霉毒素 M 族 ，注入到分析仪器中进行检测。

四、产品组成：

包括黄曲霉毒素  M 族免疫亲和柱、产品说明书及 COA。注 ：复杂样品需使用吐温 20-PBS 缓冲溶液（货号 ：PBS-004）。

五、产品参数：

1、性能参数

2、交叉反应率

六、需要但未提供的材料：

设备：HPLC、泵流操作架、高速均质器、高速粉碎机、单道微量移液器；

器皿耗材：量筒、漏斗、收集瓶、容量瓶、玻璃纤维滤纸、离心管；

试剂：色谱级甲醇、蒸馏水、标准品。

七、试剂配制：1、吐温 20-磷酸盐缓冲溶液（以下简称吐温 20-PBS）：

配制方式 1 ：使用普瑞邦吐温 20-PBS 试剂包（货号： PBS-004）进行配制；

配制方式 2 ：称取 8.00 g 氯化钠 ， 1.20 g 磷酸氢二钠 ， 0.20 g 磷酸二氢钾 ，0.20 g 氯化钾 ，用 900 mL 蒸馏水溶解 ，然后用盐酸调节 pH 值至 7.4 ，加 5 mL 吐温 20 ，最后用蒸馏水稀释定容至 1000 mL。

八、样品处理：

毒素分析的最大误差来源是样品的收集和取样过程，所以要保证样品收集和取样的代表性。

（一）液态乳、酸奶

1、称取 4g 混合均匀的试样(精确到 0.001g)于 50mL 离心管中 ，加 10mL 甲醇 ，涡旋 3min；

2、4℃、6000r/min 下离心 10min 或经玻璃纤维滤纸过滤；

3、取上清液 7mL ，加 40mLPBS 或水稀释 ，备用。 （应调 pH 值至 6-8 之间）。

（二）乳粉和特殊膳食用食品

1、称取 1g 样品(精确到 0.001g)于 50mL 离心管中 ，加入4mL50℃热水 ，混匀；

2、样液冷却至室温 ，加入 10mL 甲醇 ，涡旋 3min；

3、4℃、6000r/min 离心 10min 或经玻璃纤维滤纸过滤

4、取上清液 7mL ，加 40mL 吐温 20-PBS 或水稀释 ，备用。 （应调 pH 值至 6-8 之间）

（三）奶酪

1、称取经切细、过 1mm~2mm 圆孔筛混匀的试样 1g(精确到0.001g)置于 50mL 离心管中 ，加 1mL 水和 18mL 甲醇 ，振荡30min；

2、4℃、6000r/min 下离心 10min 或经玻璃纤维滤纸过滤；

3、将上清液或滤液移到 100mL 圆底烧瓶中 ，在旋转蒸发仪中减压浓缩至 2mL 以下，加吐温 20-PBS 稀释至约 30mL，供净化处理 。

（四）奶油

1、称取 1g(精确到 0.001g)试样 ，置于 50mL 烧杯中；

2、加入 8mL 石油醚溶解奶油 ，9mL 水和 11mL 甲醇 ，振荡30min 后 ，将全部液体移于分液漏斗中；

3、加入 0.3g 氯化钠溶解 ，静置分层后 ，将下层溶液全部移到 100mL 圆底烧瓶中，在旋转蒸发仪中减压浓缩至 10mL以下 ，加吐温 20-PBS 稀释至约 30 mL ，供净化处理。

注 ： 同 位 素 稀 释 液 相 色 谱 - 串 联 质 谱 法 参 照 国 标GB5009.24-2016。

九、操作程序：

使用前将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温。

1、连接:用 30 mL 注射器筒下端插穿免疫亲和柱上盖中间圆孔 ，使其连通；

2、上样:移取上述上清液至注射器筒内 ，打开下端堵头；

3、富集:将空气压力泵与注射器连接 ，调节压力使样品提取液以 1-3 mL/min 的流速缓慢通过免疫亲和柱，直至空气进入亲和柱 ，建议重力过柱；

4、洗涤:  依次用 10 mL 吐温  20-PBS 和 10 mL 蒸馏水分两次加压清洗，弃去全部流出液，并使 2~3mL 空气通过柱体，将免疫亲和柱内液体排干；

5、洗脱:  在亲和柱中加入 2 .0 mL 色谱级甲醇 ，通过重力过柱方式进行洗脱；然后轻微加压排净洗脱液 ，收集全部洗脱液，涡旋混匀后上机，或在 50℃下氮气缓缓的将洗脱液吹至近干 ，用初始流动相定容至 1.0mL ，涡旋 30s ，0.22µm 滤膜过滤 ，收集滤液于进样瓶中以备进样。

十、注意事项

1、上柱液 pH 要在 6~8 之间，若偏离此范围需用盐酸或氢氧化钠调节 pH；

2、若样品浓度超出柱容量 ，需减少上柱量重新检测；

3、复杂基质必须使用吐温 20-PBS 缓冲液进行稀释后再进行过柱；

4、根据实际情况可以适当增减称样量 ，同时提取液体积需按比例进行调整；

5、使用前将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温；

6、免疫亲和柱需储存在 2-8℃条件下，不可冻存或常温保存；

7、黄曲霉毒素对人体有害 ，应做好安全防护措施；

8、使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液应以 10%次氯酸钠溶液浸泡过夜后再进行清洗。

十一、产品信息：

公司可提供的真菌毒素检测产品

：本公司提供毒素固体/液体标准品及质控样品