Pribolab - EKT-012H-96TPriboFast®黄曲霉素M1高灵敏度试剂盒-35884

【概要】

黄曲霉毒素是一种霉菌毒素。就已知的 20 多种黄曲霉毒素来说，黄曲霉及寄生曲霉 A 只产生黄曲霉毒素 B1, B2, G1, G2，其

他的黄曲霉毒素都是由这四种毒素在人体、动物或微生物的新陈代谢和环境反应中衍生而来的。

黄曲霉毒素 M1是黄曲霉毒素 B1的一级代谢产物,在 1963 年被 Allcroft 和 Carnaghan 在牛奶中明确的检测出来。出于这

种原因，该衍生产物被叫做黄曲霉毒素 M1。进一步调查显示，其他哺乳动物的排泄物如奶、粪便和尿液中也含有黄曲霉毒素

M1。污染的奶和奶制品可能对人类有危害，因为黄曲霉毒素 M1和黄曲霉毒素 B1的毒性相似。

为保护人们免受黄曲霉毒素引起的疾病，除了采取适当的卫生防护措施外，我们还有必要对食品中的黄曲霉毒素M1进行

定性和定量监控。本试剂盒可以快速、经济、高灵敏检测乳及乳制品中黄曲霉毒素 M1的含量。

【实验原理】

本试剂盒采用间接竞争 ELISA 方法，在酶标板微孔上预包被黄曲霉毒素 M1抗原，样本中黄曲霉毒素 M1和此抗原竞争黄

曲霉毒素 M1抗体（抗试剂），同时黄曲霉毒素 M1抗体与酶标二抗（酶标物）相结合，经显色液显色，样本吸光值与其含有的

黄曲霉毒素 M1的量呈负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中黄曲霉毒素M1的含量。

【试剂配制】

1、洗涤工作液：用蒸馏水将浓缩洗涤液按 1:9 体积比进行稀释(1 份浓缩洗涤液+9 份蒸馏水)。

2、样本稀释液：用蒸馏水将浓缩样本稀释液按 1:9 体积比进行稀释（1 份浓缩样本稀释液+9 份蒸馏水）。

【测定前须知】

1.

使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20~25 ℃）。

2.

使用之后立即将所有试剂放回 2~8 ℃。

3.

ELISA 分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是 ELISA 测定程序中的要点。

4.

在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。

【样本前处理步骤】

牛奶：（稀释倍数 1）

取生鲜乳或成品牛奶样本于 25 ℃放置 1 h 左右，待样本回温充分后直接检测。

奶粉：（稀释倍数 7）

1、称取 1.0 g 样品，溶解于 7 mL 蒸馏水中（可适当加热助溶）。

2、振荡混匀后直接检测。

发酵乳、乳饮料：（稀释倍数 5）

取 1.0 g 样本，加入 4 mL 样本稀释液，振荡混匀 2 min 后直接检测（发酵乳样本放置过程中会出现分层，点样前摇匀即可）。

奶酪：（稀释倍数 8）

1、称取 0.5 g 样品，溶解于 4 mL 样本稀释液中。

2、剧烈振荡 5 min（可以加热促使溶解），于 4000 r/min 离心 5 min，去掉上层脂膜，取中间层检测。

（若样本中毒素含量超出试剂盒检测范围(详见计算模板)，需要将样品进行进一步稀释，计算时需要重新换算稀释倍数。）

【检测步骤】

1、按上述步骤处理相应样品。

2、加标准品溶液或样品液 50 µL/孔，并做 2 孔平行，加入 AFM1抗体 50 µL/孔，轻轻振荡混匀，加盖板膜，置室温避光环境

中反应 30 min。

3、按下述步骤洗涤四次：去盖板膜，快速翻转酶标板垂直甩干孔液，加洗液工作液 300 µL /孔，充分振摇洗涤 10 s；弃去孔

液。最后一次翻转酶标板在吸水纸上拍干液体。洗涤过程至关重要，洗涤不充分将导致精确度差，吸光值升高。

4、加酶标物 100 µL/孔，加盖板膜，置于室温避光环境中反应 15 min。

5、重复步骤 3。

6、加显色液 100 µL/孔，加盖板膜，置于室温避光环境中（如抽屉、橱柜中，显色液对光敏感）反应 15 min。

7、加终止液 50 µL/孔，终止反应，颜色从蓝色变成黄色。

8、轻轻振荡，充分混匀，于酶标仪 450 nm（可设置参考波长 630 nm）下读取吸光度值（颜色可稳定 10 min）。

【结果分析】

按上述步骤处理样品，计算时需要乘以稀释倍数。如样品毒素含量过高，需要进一步稀释时，要重新计算稀释倍数。

本公司可提供专业的数据处理软件，如需安装使用方法指导及其他技术问题，欢迎致电：400-688-5349。

【注意事项】

请严格遵守实验室规范操作，以确保实验结果的可靠性。

1．实验开始之前要将所有的试剂恢复至室温（20~25 ℃）。

2．所有的试剂使用前都要轻轻颠倒摇匀或者涡旋混匀，避免产生泡沫。

3．一旦实验开始，所有后续步骤应该在建议时间内连续完成。

4．所有试剂用完后立刻盖上盖，不同试剂之间不能交换瓶盖。

5．每个样品都要单独使用一个一次性枪头，避免交叉污染。

6．样品和标准品要同时进行操作，保证实验条件的一致性。

7．不同批次的试剂不能混用。

8．不要使用过期的试剂盒。

9．实验室设备和仪器使用前要校准精确度和准确度（微量移液枪、酶标仪等）。

10．试剂盒内标准品仅用于标准曲线配置，不用作其他用途。

【贮藏条件及保存期】

贮藏条件：保存试剂盒于 2～8 ℃。

保存期：浓缩洗涤液，浓缩样本稀释液，显色液保存期 24 个月，终止液保存期 36 个月，其他组分保存期 12 个月。。

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