一、产品用途:
本产品可选择性吸附样品提取液中的赭曲霉毒素 A,从而实现对目标物的特异性纯化。过柱纯化后的样品液杂质显著减少,可用于不同分析方法的测定。
二、概述:
赭曲霉毒素 A(Ochratoxin A)是曲霉属和青霉属的真菌形成的次级代谢产物,属烈性的肾脏毒和肝脏毒,广泛存在于各种食物中,谷物及其副产品是赭曲霉毒素 A 的主要来源。动物实验表明摄入了被这种毒素污染的饲料后,会发生急性或慢性中毒症。
三、反应原理:
本产品测定的基础是抗原抗体反应。赭曲霉毒素 A 单克隆抗体固定于柱内凝胶上,样品中的赭曲霉毒素 A 经过提取、过滤、稀释,然后缓慢通过赭曲霉毒素 A 免疫亲和柱,在柱内赭曲霉毒素 A 与抗体特异性结合,之后洗涤免疫亲和柱,除去未结合的其他物质。用甲醇:乙酸=98:2 洗脱赭曲霉毒素 A,注入到分析仪器中进行检测。
四、产品组成:
包括赭曲霉毒素 A 免疫亲和柱、产品说明书及 COA。
注:复杂样品需使用吐温 20-PBS 缓冲溶液(货号:PBS-004)。
五、产品参数:
1、性能参数
| 柱容量 | >550 ng |
| 赭曲霉毒素 A | > 90 % |
2、交叉反应率
| 赭曲霉毒素 A | 100 % |
| 赭曲霉毒素 B | 103 % |
六、需要但未提供的材料:
设备:HPLC、泵流操作架、高速均质器、高速粉碎机、单道微量移液器;
器皿耗材:量筒、漏斗、收集瓶、容量瓶、玻璃纤维滤纸、离心管;
试剂:色谱级甲醇、蒸馏水、标准品。
七、试剂配制:
1、提取液:甲醇-水(8:2)
移取 800 mL 甲醇,加蒸馏水 200 mL 混合。
2、提取液:15 %氯化钠-2 %碳酸氢钠溶液
称取 150 g 氯化钠、20 g 碳酸氢钠溶于约 950 mL 蒸馏水中,加蒸馏水定容至 1 L。
3、吐温 20-磷酸盐缓冲溶液(以下简称吐温 20-PBS):
配制方式 1:使用普瑞邦吐温 20-PBS 试剂包(货号:PBS-004)进行配制;
配制方式 2:称取 8.00 g 氯化钠,1.20 g 磷酸氢二钠,0.20 g 磷酸二氢钾,0.20 g 氯化钾,用 900 mL 蒸馏水溶解,然后用盐酸调节 pH 值至 7.4,加 5 mL 吐温 20,最后用蒸馏水稀释定容至 1000 mL。
八、样品处理:
毒素分析的最大误差来源是样品的收集和取样过程,所以要保证样品收集和取样的代表性。
注:本产品亦可按照旧版国标或国际通用方法操作,但实验前请与厂家确认
(一)粮食和粮食制品、饲料
1、将样品研磨并过 1 mm 孔径筛,不要磨成粉末,混匀后备用;
2、称样:称取 25.0 g(精确到 0.1 g)粉碎样品至均质器中;
3、提取:加 100 mL 甲醇-水(80+20)溶液高速均质提取 3 min,定量滤纸过滤;
4、稀释:移取 10.0 mL 滤液,加入 40 mL 吐温 20-PBS 缓冲液稀释至 50 mL 混匀;用玻璃微纤维滤纸过滤至澄清,取滤液备用;(应调 pH 值至 6-8 之间)
(二)酱油、醋、酱及酱制品
1、称样:称取 25.0 g(精确到 0.1 g)混匀的试样,
2、提取:加甲醇-水(80+20)溶液定容至 50.0 mL,超声提取 5 min。
3、稀释:定量滤纸过滤,移取 10.0 mL 滤液于 50 mL 容量瓶中,用吐温 20-PBS 定容至刻度,混匀;用玻璃纤维滤纸过滤至澄清,取滤液备用;(应调 pH 值至 6-8 之间)
(三)酒类
1、取脱气酒类样品(含二氧化碳的酒类样品使用前先置于 4 ℃冰箱冷藏 30 min,过滤或超声脱气)或其他不含二氧化碳的;
2、称样:称取酒类样品 20.0 g(精确到 0.1 g)于 25 mL 容量瓶中,
3、提取:加 15 %氯化钠-2 %碳酸氢钠提取液定容至刻度,混匀;用玻璃纤维滤纸过滤至澄清,滤液备用;(应调 pH 值至 6-8 之间)
注:同位素稀释液相色谱-串联质谱法参照国标 GB 5009.96-2016。
九、操作程序:符合 GB 5009.96-2016 国标方法
使用前将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温。
1、连接:用 30 mL 注射器筒下端插穿免疫亲和柱上盖中间圆孔,使其连通;
2、上样:移取上述 10 mL 上清液至注射器筒内,打开下端堵头;
3、富集:将空气压力泵与注射器连接,调节压力使样品提取液以 1-3 mL/min 的流速缓慢通过免疫亲和柱,直至空气进入亲和柱,建议重力过柱;
4、洗涤:依次用 10 mL 吐温 20-PBS 缓冲液和 10 mL 水加压清洗,弃去全部流出液,并使 2~3 mL 空气通过柱体,将免疫亲和柱内液体排干;
5、洗脱:在亲和柱中加入 2.0 mL 色谱甲醇:乙酸=98:2,通过重力过柱方式进行洗脱;然后轻微加压排净洗脱液,收集全部洗脱液,涡旋混匀,以氮气吹至近干。加入 1 mL 流动相充分溶解残渣,用有机相微孔滤膜过滤,待上机检测。
十、注意事项
1、上柱液 pH 要在 6~8 之间,若偏离此范围需用盐酸或氢氧化钠调节 pH;
2、若样品浓度超出柱容量,需减少上柱量重新检测;
3、复杂基质必须使用吐温 20-PBS 缓冲液进行稀释后再进行过柱;
4、根据实际情况可以适当增减称样量,同时提取液体积需按比例进行调整;
5、使用前将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温;
6、免疫亲和柱需储存在 2-8 ℃条件下,不可冻存或常温保存;
7、赭曲霉毒素 A 对人体有害,应做好安全防护措施;
8、使用过的玻璃容器及赭曲霉毒素 A 溶液应以 10 %次氯酸钠溶液浸泡过夜后再进行清洗。
十一、产品信息:
| 产品名称: | PriboFast®赭曲霉毒素 A 免疫亲和柱 |
| 产品货号: | PriboFast® IAC-040-3 |
| 储存条件: | 2~8℃,切勿冷冻 |
| 保质期: | 18 个月 |
本公司可提供的真菌毒素检测产品
| 类型 | 产品名称 |
|---|---|
| 酶联免疫试剂盒 | 黄曲霉毒素类(AFT、AFB1、AFM1) |
| 呕吐毒素(DON) | |
| 玉米赤霉烯酮(ZON) | |
| 赭曲霉毒素 A(OTA) | |
| 伏马毒素(FUM) | |
| T-2 毒素(T-2) | |
| 桔青霉素(CTN) | |
| 海洋毒素试剂盒 | |
| 蘑菇毒素试剂盒 / 兽药残留试剂盒 | |
| 免疫亲和柱 | 黄曲霉毒素类(AFT、AFB1、AFM1) |
| 呕吐毒素(DON) | |
| 玉米赤霉烯酮(ZON) | |
| 伏马毒素(FUM) | |
| T-2 毒素(T-2) | |
| 赭曲霉毒素(OTA) | |
| 桔青霉素(CTN) | |
| 杂色曲霉(ST) | |
| 交链孢酚 | |
| 海洋毒素免疫亲和柱 | |
| 维生素类免疫亲和柱 | |
| 鹅膏菌毒素免疫亲和柱 | |
| 双酚 A/F/S 免疫亲和柱 | |
| 真菌毒素六合一免疫亲和柱 | |
| 可定制多毒素复合免疫亲和柱 | |
| 多功能净化柱 | MFC220(DON+NIV) |
| MFC221(FUMB1+B2+B3) | |
| MFC226(AFT+ZON) | |
| MFC227(AFT+T-2) | |
| MFC228(AFT+PAT) | |
| MFC229(OTA+B) | |
| MFC331(交链孢酚) | |
| MFC330(EA) | |
| MFC350(BA) | |
| MFC390(EN) / MFC100(多毒素) | |
| 快速检测卡 | 黄曲霉毒素 B1(AFB1) |
| 赭曲霉毒素 A(OTA) | |
| 呕吐毒素(DON) | |
| 玉米赤霉烯酮(ZON) | |
| T-2 毒素(T-2) | |
| 伏马毒素(FUM) | |
| 鹅膏毒肽 |
注:本公司提供毒素固体/液体标准品及质控样品
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