Pribolab - IAC-010-1/PriboFast®黄曲霉素B1免疫亲和柱-1ML-1T-61205

一、产品用途：

本产品可选择性吸附样品提取液中的黄曲霉毒素 B1，从而对样品液中的黄曲霉毒素 B1  起到非常针对性的纯化作用，过柱纯化后的样品液纯度被提高，可用于不同分析方法的测定。

二、产品概述：

黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒性的代谢产物，是一种毒性极强的物质，具有很强的致癌性。

黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织的破坏作用，

严重时可导致肝癌甚至死亡。在天然污染的食品中以黄曲霉  毒素 B 1 最 为多 见， 其 毒性 和致 癌性 也是 最 强的 。在 玉 米、花生、小麦、棉花种子和一些干果中常能检测到黄曲霉

毒素B 1。

三、反应原理：

本产品测定的原理是抗原抗体反应。黄曲霉毒素 B1  单克隆抗体固定于柱内凝胶上，样品中的黄曲霉毒素 B1  经过提取、过滤、稀释，然后缓慢通过黄曲霉毒素 B1  免疫亲和柱，在柱内黄曲霉毒素 B1  与抗体特异性结合，之后洗涤免疫亲和柱，除去未结合的其他物质。用甲醇洗脱黄曲霉毒素 B1，注入到分析仪器中进行检测。

四、产品包装组成：

每盒中包含黄曲霉毒素 B1 免疫亲和柱及 1 套相应说明书。

五、产品性能：

1、性能参数

2、交叉反应率

六、需要的实验材料（不提供）：

注意：①磷酸盐缓冲溶液（以下简称 PBS）：称取 8.00g 氯化钠、1.20g 磷酸氢二钠、0.20g 磷酸二氢钾、0.20g 用 900mL 蒸馏水溶解，然后用盐酸调节 pH 值至 7.4，最后用蒸馏水稀释定容至 1000mL。

②1％ Triton X-100（或吐温-20）的 PBS：取 10mL Triton X-100（或吐温-20），用 PBS 稀释至 1000mL。

七、试剂配制：

提取液：①甲醇-水（70+30）移取 700mL 甲醇，加一级水300mL 混合。

②乙腈-水（84+16）移取 840mL 乙腈，加一级水 160mL混合。

八、样品处理：真菌毒素分析的最大误差来源是样品的收集和取样过程，所以要保证样品收集和取样的代表性。

注：本产品亦可按照旧版国标或国际通用方法操作，但实验前请与厂家确认

（一）一般固体样品

1、称取 5g 试样（精确到 0.01g）于 50mL 离心管中；

2、加 20.0mL 乙腈-水（84+16）或甲醇-水（70+30）溶液，涡旋混匀，置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡 20min（或高速均质 3min）；

3、在 6000r/min 下离心 10min（或均质后用玻璃纤维滤纸过滤至澄清）；

4、取滤液 4mL，加入 46mL1％ Triton X-100（或吐温-20）的 PBS（使用甲醇-水溶液提取时可减半加入）混匀（如混浊，请用玻璃纤维滤纸过滤至澄清）。

（二）植物油脂

1、称取 5g 试样（精确到 0.01g）于 50mL 离心管中；

2、加 20.0mL 乙腈-水（84+16）或甲醇-水（70+30）溶液，涡旋混匀，置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡 20min（或高速均质 3min）；

3、6000r/min 离心 10min，取上清液备用；

4、取滤液 4mL，加入 46mL1％ Triton X-100（或吐温-20）的 PBS（使用甲醇-水溶液提取时可减半加入）混匀（如混浊，请用玻璃纤维滤纸过滤至澄清）

（三）酱油、食醋

1、称取 5g 试样（精确到 0.01g）于 50mL 离心管中；

2、用乙腈或甲醇定容至 25mL（精确至 0.1mL），涡旋混匀，置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡  20min（或高速均质3min）

3、在 6000r/min 下离心 10min（或均质后用玻璃纤维滤纸过滤至澄清）；

4、取滤液 4mL，加入 46mL1％ Triton X-100（或吐温-20）的 PBS（使用甲醇-水溶液提取时可减半） 混匀（如混浊，请用玻璃纤维滤纸过滤至澄清）。

注：同位素稀释液相色谱-串联质谱法参照国标 GB5009.22-2016。九、操作程序：符合国标 GB 5009.22-2016

1、连接:将低温下的免疫亲和柱恢复至室温。将免疫亲和柱后盖取下，用剪刀剪开，重新盖上，连接于泵流操作架的  30mL 注射器下；

2、上样:移取上述提取液至注射器内，打开下端堵头；

3、富集:将空气压力泵与注射器连接，调节压力使样品提取液缓慢通过免疫亲和柱，建议重力过柱；

4、洗涤:用 20mL 一级水分两次加压清洗，弃去全部流出液，并使 2~3mL 空气通过柱体；

5、洗脱:为保证洗脱充分，建议以 2.0mL 色谱级甲醇分两步进行洗脱，重力洗脱即可。首先，将免疫亲和柱内液体排干，加 1.0mL 甲醇于柱管内，重力过柱，当溶剂通过柱子后；再加入 1.0mL 甲醇重复上述洗脱步骤，最后轻微加压排净洗脱液，合并洗脱液，将洗脱液浓缩吹干，

用 1.0mL 流动相复溶，涡旋 30s 溶解残余物，0.22μm 滤膜过滤，待测。

十、注意事项：

1、黄曲霉毒素对人体有害，应戴手套操作。

2、使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液最好用 5%浓度的次氯酸钠溶液浸泡过夜。

3、不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。

4、免疫亲和柱不使用时要 2~8℃保存，不可冻存。

5、使用前，免疫亲和柱需回至室温（20~25℃)。

6、取样量：根据实际情况可以适当增减，但不可太少，同时提取液体积要按比例随之改变。

7、pH 值：上柱液 pH 值要在 6 .0~8 .0 之间，若偏离此范围需用盐酸或氢氧化钠调节 pH 值。

十一、操作流程图示

产品信息：

：本公司提供毒素固体/液体标准品及质控样品