Pribolab - IAC-070-3/PriboFast®桔青霉素免疫亲和柱-3ML-1T-63757

一、产品用途：

本产品可选择性吸附样品提取液中的桔青霉素，从而实现对目标物的特异性纯化。过柱纯化后的样品液杂质显著减少，可用于不同分析方法的测定。

二、概述：

桔青霉素是一种由青霉菌属和曲霉菌属中多种真菌产生  的天然代谢产物 ，可导致肾脏及肝脏损害 ，是桔青霉等的毒 性代谢产物 ，主要污染大米。桔青霉素已被证实为肝脏的致 突变原并且研究显示其可能同时还是地方性巴尔干肾病和猪  肾病的致病原。

三、反应原理：

本产品测定的基础是抗原抗体反应。桔青霉素单克隆抗体固定于柱内凝胶上 ，样品中的桔青霉素经过提取、过滤、稀释，然后缓慢通过桔青霉素免疫亲和柱 ，在柱内桔青霉素与抗体特异性结合，之后洗涤免疫亲和柱 ，除去未结合的其他物质。用洗脱液洗脱桔青霉素 ，注入到分析仪器中进行检测。

四、产品组成：

包括桔青霉素免疫亲和柱、产品说明书及 COA。

注 ：复杂样品需使用吐温 20-PBS 缓冲溶液（货号：PBS-004）。

五、产品参数：

1、性能参数

六、需要但未提供的材料：

设备：HPLC、泵流操作架、高速均质器、高速粉碎机、单道微量移液器；

器皿耗材：量筒、漏斗、收集瓶、容量瓶、玻璃纤维滤纸、离心管；

试剂：色谱级甲醇、蒸馏水、磷酸、 甲酸标准品。

七、试剂配制：

1、提取液：甲醇-水（7:3）

移取 700 mL 甲醇 ，加蒸馏水 300mL 混合。

2、10mM ,pH7.5 磷酸溶液

取 1.376mL  磷酸溶液 ，使用纯水加至体积  2000mL ，用氢氧化钠调节 pH  值至 7.5。

3、10mM ,pH2.5 磷酸溶液

取 1.376mL  磷酸溶液 ，使用纯水加至体积  2000mL ，用2 M 氢氧化钠调节 pH  值至 2.5。

4、洗脱液 Ⅰ ：甲醇-10mmol/L  磷酸溶液(pH2.5)（7:3）

移取 700 mL 甲醇，加 10mmol/L  磷酸溶液(pH2.5)300mL混合。

5、洗脱液Ⅱ：甲醇-0.1%磷酸溶液（7:3）

移取 700 mL 甲醇 ，加 0.1%磷酸溶液 300mL 混匀。

6、吐温 20-磷酸盐缓冲溶液（以下简称吐温 20-PBS）：

配制方式 1 ：使用普瑞邦吐温 20-PBS 试剂包（货号： PBS-004）进行配制；

配制方式 2 ：称取 8.00 g 氯化钠 ， 1.20 g 磷酸氢二钠 ， 0.20 g 磷酸二氢钾 ，0.20 g 氯化钾 ，用 900 mL 蒸馏水溶解 ，然后调节 pH 值至 7.0 ，加 5 mL 吐温 20 ，最后用蒸馏水稀释定容至 1000 mL。

八、样品处理：

毒素分析的最大误差来源是样品的收集和取样过程，所以要保证样品收集和取样的代表性。

（一）红曲粉样品

1、称样：称取  1.0 g  磨细的样品 ，置于  50mL  离心管中；

2、提取：加入 20 mL  甲醇-水（7:3）溶液。高速均质 2min。用玻璃纤维滤纸过滤至澄清 ，收集滤液；

3、稀释：移取  1.0mL  上述滤液 ，置于另一干净的容器中。用 39 mL 吐温 20-PBS 缓冲溶液，将滤液稀释，混匀。将上步稀释液通过玻璃纤维滤纸过滤收集滤液于一洁净的容器中（应调 pH 值至 6-8 之间）。

（二）大米、玉米、辣椒样品

1、称样：称取  10.0 g  磨细的样品 ，置于均质器中；

2、提取：加入 50 mL  甲醇-水（7:3）溶液。高速均质 2min。用玻璃纤维滤纸过滤至澄清 ，收集滤液；

3、稀释：移取  1.0 mL  上步的滤液，置于另一干净的容器中。用 49 mL 10mM 磷酸溶液(pH7.5) ，将滤液稀释 ，混匀。将上步稀释液通过玻璃纤维滤纸过滤，收集滤液于一洁净的容器中。

九、操作程序：

使用前将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温。

1、连接:  用 30 mL 注射器筒下端插穿免疫亲和柱上盖中间圆孔 ，使其连通；

2、上样:  移取上述 10 mL 上述液体至注射器筒内，打开下端堵头；

3、富集:  将空气压力泵与注射器连接，调节压力使样品提取液以 1-3 mL/min 的流速缓慢通过免疫亲和柱，直至空气进入亲和柱 ，建议重力过柱；

4、洗涤:  红曲粉样品依次用  10mL 吐温 20-PBS 缓冲液和水进行淋洗 ，大米、玉米、辣椒样品用 5 mL 10mM ，pH7.5 磷酸溶液进行淋洗，弃去全部流出液，并使 2~3mL 空气通过柱体 ，将免疫亲和柱内液体排干；

5、洗脱:  红曲粉样品在亲和柱中加入 2.0 mL 洗脱液聂，大米、玉米、辣椒样品在亲和柱中加入 2 .0 mL 洗脱液Ⅰ ,  通过重力过柱方式进行洗脱；然后轻微加压排净洗脱液 ，收集全部洗脱液，涡旋混匀。用有机相微孔滤膜过滤，待上机检测。注 ：也可使用 2mL 色谱级甲醇进行洗脱 ，其他操作同上。

十、注意事项

1、上柱液 pH 要在 6~8 之间，若偏离此范围需用盐酸或氢氧化钠调节 pH；

2、富集前应确认甲醇比例低于 20% ，乙腈比例低于 10%；

3、若样品浓度超出柱容量 ，需减少上柱量重新检测；

4、根据实际情况可以适当增减称样量 ，同时提取液体积需按比例进行调整；

5、使用前将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温；

6、免疫亲和柱需储存在 2-8℃条件下，不可冻存或常温保存；

7、桔青霉素对人体有害 ，应做好安全防护措施；

8、使用过的玻璃容器及桔青霉素溶液应以 10%次氯酸钠溶液浸泡过夜后再进行清洗。

十一、产品信息：

公司可提供的真菌毒素检测产品

：本公司提供毒素固体/液体标准品及质控样品