Pribolab - IAC-011-3-25PriboFast®黄曲霉素总量免疫亲和柱3ml-66417

一、产品用途：

本产品可选择性吸附样品提取液中的黄曲霉毒素，从而实现对目标物的特异性纯化。过柱纯化后的样品液杂质显著减少 ，可用于不同分析方法的测定。

二、概述：

黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒性的代谢产物，是一种毒性极强的物质，具有很强的致癌性。黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织的破坏作用 ，严重时可导致肝癌甚至死亡。在玉米、花生、小麦、棉花种子和一些干果中常能检测到黄曲霉毒素。

三、反应原理：

本产品测定的基础是抗原抗体反应。黄曲霉毒素单克隆抗体固定于柱内凝胶上 ，样品中的黄曲霉毒素经过提取、过滤、稀释 ，然后缓慢通过黄曲霉毒素免疫亲和柱 ，在柱内黄曲霉毒素与抗体特异性结合 ，之后洗涤免疫亲和柱 ，除去未结合的其他物质。用甲醇洗脱黄曲霉毒素 ，注入到分析仪器中进行检测。

四、产品组成：

包括黄曲霉毒素总量免疫亲和柱、产品说明书及 COA。注 ：复杂样品需使用吐温 20-PBS 缓冲溶液（货号：PBS-004）。

五、产品参数：

交叉反应率

六、需要但未提供的材料：

设备：HPLC、泵流操作架、高速均质器、高速粉碎机、单道微量移液器；

器皿耗材：量筒、漏斗、收集瓶、容量瓶、玻璃纤维滤纸、离心管；

试剂：色谱级乙腈、色谱级甲醇、蒸馏水、标准品。

七、试剂配制：

1、提取液：①甲醇-水（7:3）

移取 700 mL 甲醇 ，加蒸馏水 300 mL 混合。

②乙腈-水（84:16）

移取 840 mL 乙腈 ，加蒸馏水 160 mL 混合。2、吐温 20-磷酸盐缓冲溶液（以下简称吐温 20-PBS）：

配制方式 1 ：使用普瑞邦吐温 20-PBS 试剂包（货号： PBS-004）进行配制；

配制方式 2 ：称取 8.00 g 氯化钠 ， 1.20 g 磷酸氢二钠 ， 0.20 g 磷酸二氢钾 ，0.20 g 氯化钾 ，用 900 mL 蒸馏水溶解 ，然后用盐酸调节 pH 值至 7.4 ，加 5 mL 吐温 20 ，最后用蒸馏水稀释定容至 1000 mL。

八、样品处理：

毒素分析的最大误差来源是样品的收集和取样过程，所以要保证样品收集和取样的代表性。

（一）一般固体样品及半流体样品

1、称样：称取 5 g 试样（精确到 0.01 g）于 50 mL 离心管中；

2、提取：加 20.0 mL 乙腈-水（84+16）或甲醇-水（70+30）溶液，涡旋混匀，置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡 20 min（或高速均质 3 min）；在 6000 r/min 下离心 10 min（或均质后用玻璃纤维滤纸过滤至澄清）；

3、稀释：取滤液 4 mL，加入 46 mL 吐温 20-PBS 缓冲液（使用甲醇-水溶液提取时可减半加入）混匀（如混浊 ，请用玻璃纤维滤纸过滤至澄清）。

（二）植物油脂

1、称样：称取 5 g 试样（精确到 0.01 g）于 50 mL 离心管中；

2、提取：加 20.0 mL 乙腈-水（84+16）或甲醇-水（70+30）溶液 ，涡旋混匀 ，置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡 20 min（或高速均质 3 min）；6000 r/min 离心 10 min ，取上清液备用；

3、稀释：取滤液 4 mL，加入 46 mL 吐温 20-PBS 缓冲液（使用甲醇-水溶液提取时可减半加入）混匀（如混浊 ，请用玻璃纤维滤纸过滤至澄清）。

（三）酱油、食醋

1、称样：称取 5 g 试样（精确到 0.01 g）于 50 mL 离心管中；

2、提取：用乙腈或甲醇定容至 25 mL（精确至 0.1 mL），涡旋混匀 ，置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡 20 min（或高速均质 3 min） ；在 6000 r/min 下离心 10 min（或均质后用玻璃纤维滤纸过滤至澄清）；

3、稀释：取滤液 4 mL，加入 46 mL 吐温 20-PBS 缓冲液（使用甲醇-水溶液提取时可减半）混匀 ，（如混浊 ，请用玻璃纤维滤纸过滤至澄清）。

注 ： 同 位 素 稀 释 液 相 色 谱 - 串 联 质 谱 法 参 照 国 标   GB 5009.22-2016。

九、操作程序：

使用前将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温。

1、连接:  用 30 mL 注射器筒下端插穿免疫亲和柱上盖中间圆孔 ，使其连通；

2、上样:  移取上述上清液至注射器筒内 ，打开下端堵头；

3、富集:  将空气压力泵与注射器连接，调节压力使样品提取液以 1-3 mL/min 的流速缓慢通过免疫亲和柱，直至空气进入亲和柱 ，建议重力过柱；

4、洗涤:  依次用 10 mL   吐温 20-PBS 缓冲液和 10 mL 水加压清洗，弃去全部流出液，并使 2~3mL 空气通过柱体，将免疫亲和柱内液体排干；

5、洗脱:  在亲和柱中加入 2 .0 mL 色谱级甲醇 ，通过重力过柱方式进行洗脱；然后轻微加压排净洗脱液 ，收集全部洗脱液 ，涡旋混匀 ，以氮气吹至近干。用 1.0mL 流动相复溶 ，涡旋 30s溶解残余物 ，0.22 μm 滤膜过滤 ，待测。

十、注意事项

1、上柱液 pH 要在 6~8 之间，若偏离此范围需用盐酸或氢氧化钠调节 pH；

2、若样品浓度超出柱容量 ，需减少上柱量重新检测；

3、复杂基质必须使用吐温 20-PBS 缓冲液进行稀释后再进行过柱；

4、根据实际情况可以适当增减称样量 ，同时提取液体积需按比例进行调整；

5、使用前将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温；

6、免疫亲和柱需储存在 2-8℃条件下，不可冻存或常温保存；

7、黄曲霉毒素总量对人体有害 ，应做好安全防护措施；

8、使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素总量溶液应以 10%次氯酸钠溶液浸泡过夜后再进行清洗。

十一、产品信息：

本公司可提供的真菌毒素检测产品

注 ：本公司提供毒素固体/液体标准品及质控样品